LAMP試劑盒的工作原理及主要組成成分
更新時(shí)間：2025-03-23 點(diǎn)擊次數(shù)：16次
LAMP試劑盒是一種基于LAMP技術(shù)的分子生物學(xué)工具，廣泛應(yīng)用于病原體的檢測(cè)和基因擴(kuò)增領(lǐng)域。LAMP技術(shù)是一種簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)、無(wú)需復(fù)雜設(shè)備即可進(jìn)行DNA或RNA擴(kuò)增的技術(shù)，具有較高的靈敏度和簡(jiǎn)便性，適用于快速檢測(cè)和臨床診斷。
LAMP試劑盒的主要組成成分：
1.LAMP反應(yīng)緩沖液：提供適合LAMP反應(yīng)的化學(xué)環(huán)境，包括pH調(diào)節(jié)、鹽濃度等。
2.引物：LAMP反應(yīng)中使用四個(gè)特異性引物：外引物（F3和B3）和內(nèi)引物（FIP和BIP）。這些引物能夠特異性地結(jié)合到目標(biāo)DNA或RNA序列的不同區(qū)域，從而啟動(dòng)擴(kuò)增過(guò)程。
3.DNA聚合酶：LAMP反應(yīng)使用高效的DNA聚合酶（如Bst聚合酶），能夠在恒定溫度下進(jìn)行DNA擴(kuò)增，同時(shí)具有較強(qiáng)的鏈置換活性，促進(jìn)LAMP反應(yīng)的進(jìn)行。
4.dNTPs：提供四種脫氧核苷酸，用于擴(kuò)增過(guò)程中DNA鏈的合成。
5.目標(biāo)基因檢測(cè)引物：針對(duì)特定病原體或基因的檢測(cè)需求，試劑盒中會(huì)配有針對(duì)特定目標(biāo)序列的引物。
6.緩沖液和配套試劑：如Mg2+、鈉離子等，它們?cè)贚AMP反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用，支持酶的活性和擴(kuò)增過(guò)程。
LAMP試劑盒的工作原理：
1.引物與目標(biāo)DNA結(jié)合：LAMP反應(yīng)中的四個(gè)引物分別與目標(biāo)DNA序列的不同區(qū)域結(jié)合。外引物F3和B3位于目標(biāo)序列的兩端，內(nèi)引物FIP和BIP則位于F3和B3之間。
2.鏈置換擴(kuò)增：當(dāng)引物與目標(biāo)DNA結(jié)合后，DNA聚合酶開(kāi)始合成新的DNA鏈。由于LAMP反應(yīng)中使用的聚合酶具有鏈置換活性，當(dāng)合成的新鏈遇到雙鏈DNA時(shí)，能夠?qū)㈦p鏈DNA分開(kāi)，從而繼續(xù)擴(kuò)增反應(yīng)。
3.形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)：LAMP的關(guān)鍵特點(diǎn)之一是引物設(shè)計(jì)能夠形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，使得目標(biāo)DNA的擴(kuò)增更加高效。
4.產(chǎn)物檢測(cè)：LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物通常呈現(xiàn)出非常高的拷貝數(shù)，因此檢測(cè)手段可以使用傳統(tǒng)的渾濁度變化、熒光信號(hào)、顏色變化等方式。
